ПЦР анализа: шта је то, сведочење и припрема за студију

ПЦР метода или ПЦР се користи у лабораторијској дијагностици већине заразних болести. Омогућава детекцију генетског материјала микроорганизама у испитиваном материјалу и на тај начин их идентификује.
Садржај
  1. Шта је то
  2. Основе методе
  3. ток студије
  4. Предности методе ПЦР
  5. Недостаци анализе
  6. Индикациа за ПЦР студии
  7. Припрема за студију
  8. Којим лекаром да се посаветује
  9. Погледај популарне чланке

Шта је то

Метод је развијен 1983. године, а 1993. године његов аутор, Муллис, добио је Нобелову награду.

Основе методе

ПЦР анализа открива јединствени генетски материјал у тест материјалу који омогућава идентификацију микроорганизма.

Свака врста микроорганизама, биљке или животиње има јединствен скуп хромозома. Формирају их ДНК - деоксирибонуклеинска киселина. Мали фрагменти ДНК се називају нуклеотиди, а њихова специфична секвенца чини ген. Сваки ген кодира синтезу једног протеина, на пример, колагена, албумина и свих других. Секвенца нуклеотида је јединствена. За сваку врсту живих организама постоје уобичајене регије ДНК одговорне за униформност унутар ове врсте.

Анализа ДНК неколико стотина микроба заробљених у материјалу за студију неће откритиобрасци врста. Неопходно је много пута повећати број значајних генетских компоненти, што ће омогућити њихову идентификацију. Овај проблем је решен ПЦР методом.

Студија се односи на област молекуларне биологије. ДНК полимераза и слободни нуклеотиди се додају у микробну ДНК. Полимераза - ензим који обезбеђује више копија жељене површине постојећих нуклеотида. Покрените процес прајмера - кратке нити рибонуклеинске киселине (РНК), причвршћене на почетак жељеног гена.

Процес анализе се састоји од неколико фаза, од којих свака захтијева одређено вријеме и температуру. У року од неколико сати, потребна количина материјала за анализу се добија из хиљадитог грама бактеријске ДНК. Савремена опрема омогућава поновну копију ДНК чак и једне ћелије, на пример, ћелије сперме.

Напредак у истраживању

Фазе анализе:

  • узимање биолошког материјала (крви, урина, вагиналног секрета, пљувачке итд.) Од пацијента и достава у лабораторију;
  • раздвајање два ланца ДНК, чије преплитање формира хромозом, и њихово пречишћавање од нечистоћа;
  • удвостручење жељеног дела ДНК ланца, због чега његов број експоненцијално расте;
  • третман добијеног материјала са растворима који изазивају специфичну луминисценцију добијених фрагмената ДНК, овим бојањем препознају која је бактерија или вирус у извору; да се користе ДНК фракцијеелецтропхоресис.

Трајање анализе је 4-5 сати.

Предности ПЦР методе

Ланчана реакција полимеразе има такве предности у односу на традиционалне методе откривања инфективних агенаса:

  • директно одређивање гена микроорганизама, за разлику одод откривања антитела до ње на многе друге начине идентификације;
  • специфичност, тј. Дефиниција специфичног типа патогена;
  • осетљивост: чак је и једна ћелија микроорганизма довољна за дијагнозу;Генерално, потребна количина патогена је 10 пута мања него за друге методе;
  • свестраност биоматеријала - испитује се не само крв, већ и ћелије густих ткива, остаци епитела, мукозни секрети и било који други медиј тамо гдје може бити микроба;
  • брзина добијања резултата је неколико пута већа него када се користе друге методе;
  • способност препознавања хроничних, тромих и скривених инфекција;
  • дезинфекција материјала узетих од пацијента и елиминација инфекције лабораторијског особља;
  • потпуна аутоматизација истраживачког процеса.

Недостаци анализе

Недостаци ПЦР-а углавном се односе на његову техничку сложеност:

  • потребно је изабрати исправну РНК секвенцу- прајмери, као и припрема смеше нуклеотида за синтезу ДНК;
  • Метода је веома осетљива, тако да ако постоје различити типови микроба у узорку, може дати погрешне резултате;
  • треба темељно очистити.материјал од нечистоћа људских протеина и дрога, јер смањују тачност дијагнозе;
  • захтева контролно поређење резултата са узорцима за које се зна да садрже или не садрже микробни материјал, као и да уопште нема ДНК за одређивање грешака и контаминације.

Лажно негативни резултати ПЦР-а су узроковани кршењем технике анализе и промјенама у генетичкој секвенци било које од компоненти реакције. Наишли су и на лажно позитивне податке - у случају случајног подударања почетних нуклеотида и других реагенаса који се користе са једним од гена микроорганизма.

Изолација микроорганизма не указује увијек на то да је он узроковао болест. Код анализе људске ДНК постоји још један проблем: генетска основа већине болести је још увијек непозната, што до сада онемогућава дијагнозу неинфективне патологије на микробиолошкој разини. Овај правац медицинске генетике се развија веома активно.

Индикациа за ПЦР студии

У већини случајева, ПЦР дијагностика се користи код пацијената са инфективним болестима како би се идентификовао микроорганизам који је узроковао болест.

Ова анализа се користи у таквим ситуацијама:

  • потребу за идентификацијом и идентификацијом вируса, бактерија, протозоа код било које заразне болести, када је потребна дијагностичка тачност;
  • дијагноза генетских болести код људи ;
  • идентификација у поређењу сагенетски материјал познатог порекла;
  • анализа ткива добијених фином иглом биопсије, које је веома тешко истражити другим методама;
  • дијагноза леукемије и малигних тумора;
  • спровођење експеримената са преживљавањем ембрионалних матичних ћелија код животиња (код људи, забрањена је употреба таквих ћелија), као и узгој линија лабораторијских мишева са унапред одређеном генетском болешћу.

Изгледи за употребу ПЦР реакције и њених варијанти у медицини и биологији обухваћају машту - од тестирања нових лијекова на нивоу гена до стварања трансгених организама са жељеним својствима. Рад у овом правцу се одвија у највећим светским лабораторијама, што помаже да се побољша ПЦР метода и на нивоу апликације, за дијагнозу заразних болести људи.

У медицини се ПЦР метода обично користи за дијагностицирање и процену ефикасности лечења таквих болести:

\ т

Припрема за проучавање

3 дана прије студије потребно је напустити употребу алкохолних пића. На рецепт, одређени лекови, као што су антибиотици, се поништавају.

Правила припреме задијагноза гениталних инфекција:

  • 2 дана пре анализе, прекините секс;
  • 2 сата пре студије не уринира;
  • претходне ноћи и ујутро не туширајте; опрати само топлом водом без детерџената;
  • не подлежу ПЦР-у током менструације и 4 дана након колпоскопије (код жена).

Општа правила припреме:

  • у 2 дана искључују интензивне физичке активности, спорт;
  • не пушите и не једите храну од јутра у студији;
  • ако се материјал узима из уста и назофаринкса - не перемо зубе ујутру.

Поузданост овог прецизног, али не и јефтиног, дијагностичког метода зависи од примене ових једноставних правила. Само-тумачење резултата неће пружити потребне информације о болести и њеном третману. Зато се, након добијања података из ПЦР студије, треба консултовати са лекаром.

Којим лекаром да се посаветује

Ако се сумња на полно преносиву болест, гинеколог, уролог, андролог, венеролог ће упутити на ПЦР. Студија о хепатитису и ХИВ инфекцији прописује специјалиста за инфективне болести, а код туберкулозе специјалиста за туберкулозу. ПЦР у својој пракси користе лекари многих специјалности, на пример, онколози, хематолози, гастроентеролози, генетика.

Корисне информације о ПЦР анализи:

Венеролог, уролог С. Г. Ленкин говори о ПЦР анализи: